بررسی انتقال ژن لوسیفراز کرم شب تاب با تابش نور قرمز به جنین های سوماتیکی رز به روش اگروباکتریوم

رز یکی از گیاهان زینتی و تجاری بسیار مهم می باشد. به همین دلیل امروزه کشت بافت و انتقال ژن این گیاه از اهمیت ویژه ای برخوردار است. بر اساس گزارشات ارائه شده تا به امروز، انتقال ژن به روش اگروباکتریوم به این گیاه معمولا از طریق جنین های سوماتیکی صورت می گیرد. همچنین از بین ژن های گزارشگر(reporter genes ) مورد استفاده در مهندسی ژنتیک، ژن لوسیفراز به عنوان گزارشگر ایده آل به منظور بهینه سازی سیستم انتقال ژن، کاربرد فراوان دارد. تحقیق حاضر جهت انتقال ژن لوسیفراز حشره شبتاب گونه ایرانی lampyris turkestanicus با تابش نور قرمز(ff-luc) توسط باکتری agrobacterium tumefaciens سوش lba4404 به گل رز، به منظور بهینه سازی سیستم انتقال ژن به این گیاه صورت گرفته است. جوانه های جانبی گل رز در محیط درون شیشه کشت شده و برگهای مناسب آنها به عنوان ریزنمونه اولیه برای کالوس زایی در محیط مخصوص قرار گرفتند. از بین 38 تیمار هورمونی در محیط ms و 16 تیمار هورمونی در محیط b5 محیط های حاوی mg 2 هورمون 2,4-d و mg 5/0 هورمون naa در محیط ms و محیط حاوی mg 5 هورمون 2,4-d و همچنین محیط حاوی mg 5/0 هورمون 2,4-d و mg 5/2 هورمون naa و mg 5/0هورمون کینتین در محیط b5 بهترین محیط ها برای تولید کالوس بودند. پس از آن کالوس های مناسب تحت تاثیر هشت تیمار مختلف هورمونی در محیط ms جهت تولید جنین قرار گرفتند، که محیط حاوی mg 1 هورمون tdz بهترین نتیجه را برای جنین زایی داشت. پس از بدست آوردن جنین های مناسب، این جنین ها با اگروباکتریوم سویه lba4404 حاوی ناقل بیانی pcambia1304 آلوده شدند. ریزنمونه های تلقیح شده، برای باززایی گیاه به محیط کشت انتخابی ms حاوی آنتی بیوتیک های هیگرومایسین و سفوتاکسیم منتقل شدند. گیاهچه های باززایی شده بر روی محیط کشت انتخابی، جداسازی و به محیط کشت ریشه زایی انتقال یافتند. درنهایت گیاهچه های ریشه دار شده به پرلایت استریل منتقل شده و پس از سازگار شدن به گلدان هایی با خاک مناسب منتقل شدند. بررسی مولکولی pcr با استفاده از آغازگرهای اختصاصی ژن لوسیفراز، بر روی dna ژنومی استخراج شده از گیاهان باززایی شده صورت پذیرفت و تراریخت بودن آنها را تائید گردید.